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非洲猪瘟病毒检测试剂盒(PCR荧光探针法)

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产品名称: 非洲猪瘟病毒检测试剂盒(PCR荧光探针法)
产品型号: ASFV
产品展商: 普分
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简单介绍

非洲猪瘟病毒检测试剂盒(PCR荧光探针法)免核酸提取,本试剂盒适用于非洲猪瘟病毒检测,可用于临床非洲猪瘟病毒感染的辅助诊断,但不作确诊使用。非洲猪瘟病毒检测试剂盒(PCR荧光探针法)本试剂盒针对非洲猪瘟病毒的高度保守区域设计特异性引物和探针,在反应体系中含非洲猪瘟病毒基因组模板的情况下,PCR反应得以进行并释放荧光信号。利用荧光定量PCR仪对PCR过程中相应通道信号进行实时监测和输出,实现检测结果的定性分析。


非洲猪瘟病毒检测试剂盒(PCR荧光探针法)  的详细介绍

非洲猪瘟病毒检测试剂盒(PCR荧光探针法)免核酸提取,快速检测。*农业部认可的免核酸提取专门的一家。
【产品名称】
通用名称:非洲猪瘟病毒检测试剂盒(PCR荧光探针法)
英文名称:African Swine Fever virus Detection Kit (Real-Time PCR Method)
【包装规格】 & 50T/盒
【预期用途】
本试剂盒适用于非洲猪瘟病毒检测,可用于临床非洲猪瘟病毒感染的辅助诊断,但不作确诊使用。
【检验原理】    
本试剂盒针对非洲猪瘟病毒的高度保守区域设计特异性引物和探针,在反应体系中含非洲猪瘟病毒基因组模板的情况下,PCR反应得以进行并释放荧光信号。利用荧光定量PCR仪对PCR过程中相应通道信号进行实时监测和输出,实现检测结果的定性分析。
【主要组成成份】
序号    组成      50T/盒
1    ASFV  PCR反应液      1100 μL/管
2    ASFV 阳性对照         100 μL/管
3    ASFV 阴性对照         100 μL/管

4   样本稀释液              12 mL×2管
5    样本裂解液              1500uL/管
注:阴性对照为猪基因组DNA,阳性为非洲猪瘟经灭活处理的核酸提取物。
【储存条件及有效期】样本稀释液保存2~8度。其余避光-20℃+—5度保存,避免反复冻融,有效期12个月。
【适用仪器】Bio-Rad系列、卡尤迪生物科技MINI8全系列 、等多通道实时荧光定量PCR仪。
【检验方法】
1.    试剂准备(试剂准备区)
(1)从冰箱中取出试剂盒, 从试剂盒中取出实验所需试剂,充分融化混匀5秒,并瞬时离心5秒,以去除管壁附着液体。
2.样本准备(样本处理区)
具体操作请来电咨询本故事。

4. PCR(PCR扩增区)
(1)取样本处理区准备好的PCR反应管,放置在实时荧光定量PCR仪样品槽相应位置,并记录放置顺序。
(2)按下表设置仪器核酸扩增相关参数进行PCR扩增。
 
反应体积    25 μL    通道选择    FAM通道采集非洲猪瘟病毒荧光信号
PCR
反应
条件    步骤    条件    循环数
    UNG处理        95℃:1分钟(min)    15
    预变性    55℃:1分钟(min)    1  cycles
    预扩增    95℃:1分钟(min)    1
      PCR扩增    95℃:5秒(s)    30 cycles
        60℃:  15秒(s)
(此阶段结束时采集荧光信号)    

注:ABI系列荧光PCR仪在设置时不选ROX校正,设置淬灭基团选择None。
【参考值(参考范围)】
1.试剂盒有效性判定:
 (1)阳性对照:有典型S型扩增曲线或Ct值≤23。
 (2)阴性对照:无S扩增曲线。
2.标本结果判定:
(1)阳性:标本检测结果Ct值≤23或有明显指数增长期。
(2)可疑:标本检测结果Ct值在23~30范围内。此时应对标本进行重复检测,如重复实验结果Ct值仍在30范围内,有明显指数增长期,则判定为阳性,否则为阴性。
(3)阴性:标本检测结果Ct值>38或无Ct值。
【检验结果的解释】
通道及检测结果    标本检测结果解释
FAM    
阳性(+)    标本中检出非洲猪瘟病毒DNA
阴性(-)    标本中未检出非洲猪瘟病毒DNA
【检验方法的局限性】
1.    当检测样本中被检核酸浓度低于本试剂盒的*低检出限时可能会发生假阴性的结果。
2.    被检样本在采集、运输、储存以及处理过程中操作方式不当容易造成DNA降解而产生假阴性结果。
3.    样本在采集、运输、储存以及处理过程中发生交叉污染,则容易得到假阳性结果。

【注意事项】
1.    整个检测过程应严格按照本说明书要求分别在试剂准备区、样本处理区和PCR扩增区进行操作,各区实验服、仪器、耗材应独立使用,不能混用;实验用吸头采用带滤芯吸头;样本处理区应配有生物安全柜,样本处理在生物安全柜中进行操作;三个区应该配有紫外线杀菌装置。
2.    为避免DNA降解,样本处理过程应在0-4℃条件下操作,且完成实验后立即上机检测;样本处理过程中使用的器具耗材应经过无核酶处理。
3.    每次实验应该设置阴、阳性对照。
4.    试剂盒所有试剂在使用前应该在常温下充分融化混匀,并应瞬时离心。
5.    试剂盒内所配阴性和阳性对照在**次使用前应全部转移至标本准备区,并单独存放。
6.    为防止荧光干扰,应避免裸手直接接触PCR反应管,并应避免在PCR反应管上进行任何标记。
7.    仪器扩增相关参数应按照本说明书相关要求进行设置;不同批号试剂不能混用。
8.    ABI系列荧光定量PCR仪参数设置中不选ROX校正,淬灭基因选择None。
9.    实验过程中产品的废弃物应该进行无害化处理后方可丢弃。

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